無菌制劑的藥企至少每半年需要一次無菌工藝模擬（APS），又稱為培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)（MFT），以保證生產(chǎn)線的無菌生產(chǎn)。以往APS多用胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基（簡(jiǎn)稱TSB）。但歐洲藥典EP 8.0-2014已提出非動(dòng)物源材料的優(yōu)先選擇原則，以避免動(dòng)物源成分可能帶來的BSE/TSE風(fēng)險(xiǎn)。BSE/TSE發(fā)生率低，但在動(dòng)物體內(nèi)有潛伏期，沒有明顯癥狀，且一旦發(fā)現(xiàn)，影響巨大，故WHO、FDA與CE均有專章討論降低BSE/TSE發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的措施。我國(guó)近年發(fā)布的《無菌工藝模擬試驗(yàn)指南（無菌制劑）》、《無菌工藝模擬試驗(yàn)指南（無菌原料藥）》對(duì)此亦有提及：“包含動(dòng)物來源成分的培養(yǎng)基，應(yīng)考慮培養(yǎng)基引入外源污染的風(fēng)險(xiǎn)。如BSE（可傳染性海綿腦病）、TSE（瘋牛?。┑蕊L(fēng)險(xiǎn)”，并說“亦可使用植物來源的培養(yǎng)基”。（見《無菌工藝模擬試驗(yàn)指南（無菌原料藥）》6.3.2.4條）

如植物源TSB性能與動(dòng)物源TSB相符，且價(jià)格一致，則可不必考慮BSE/TSE等動(dòng)物源成分帶來的外源因子風(fēng)險(xiǎn)問題。在性能方面，《指南》規(guī)定有“培養(yǎng)基促生長(zhǎng)能力試驗(yàn)”，所用標(biāo)準(zhǔn)測(cè)試菌株包括白色念珠菌（CMCC98001）、黑曲霉（CMCC98003）、枯草芽孢桿菌（CMCC63501）、金黃色葡萄球菌（CMCC26003）、銅綠假單胞菌（CMCC10104）和生孢梭菌（CMCC64941）（必要時(shí)）等。“還可考慮加入環(huán)境和無菌檢查中發(fā)現(xiàn)的典型微生物。促生長(zhǎng)試驗(yàn)接種量應(yīng)小于100CFU。”

植物源TSB可采用濕熱滅菌和輻照滅菌，無論何種滅菌方式，均“應(yīng)對(duì)滅菌過程進(jìn)行驗(yàn)證，輻照滅菌還需在產(chǎn)品質(zhì)量報(bào)告中體現(xiàn)驗(yàn)證中所用的菌種和劑量等信息”。

早在2007年，Journal of Microbiological Methods(微生物學(xué)方法期刊）就發(fā)表了美國(guó)ATCC參與的一項(xiàng)研究，表明在促生長(zhǎng)能力方面，植物源TSB*可以替代動(dòng)物源TSB。菌株的表型會(huì)發(fā)生輕微的變化，但不影響菌株品系的遺傳學(xué)特征，即菌種鑒定不受影響。文中沒有提所用植物源TSB的品牌。

在推動(dòng)植物源培養(yǎng)基應(yīng)用方面，HiMedia公司走在世界前列，不僅將各種植物源培養(yǎng)基配方標(biāo)準(zhǔn)化，而且具有世界比較多的植物源培養(yǎng)基品種，不少被載入2010年美國(guó)CPC學(xué)術(shù)出版社出版的第四版《微生物培養(yǎng)基手冊(cè)》。在APS的應(yīng)用方面，HiMedia公司推出了一系列植物源TSB產(chǎn)品，具體如下：

1、植物源TSB（輻照），粉末型，貨號(hào)MV011G

2、植物源TSB（輻照），顆粒型，貨號(hào)GMV011G

3、植物源TSB（輻照），粉末型，含MTF指示劑，貨號(hào)MV2018G

4、化學(xué)限定TSB（輻照），粉末型，含MTF指示劑，貨號(hào)MCD2018G

值得一提的是，顆粒型和粉末型培養(yǎng)基相比，沒有揚(yáng)塵和受潮的問題。TSB中添加MTF指示劑，可通過顏色變化顯著區(qū)分是否有菌，見下圖?；瘜W(xué)限定TSB的好處是無批間差異。

HiMedia生產(chǎn)的植物源TSB（輻照，粉末型，貨號(hào)MV011G）經(jīng)過嚴(yán)格而全面的質(zhì)控，合格后方能出廠。HiMedia生產(chǎn)工藝也具有ISO9001、ISO13485、WHO-GMP質(zhì)量體系認(rèn)證，產(chǎn)品具有美國(guó)FDA注冊(cè)和歐盟IVDD注冊(cè)證書。

MV011G的部分質(zhì)控項(xiàng)目包括：

注：以下方法均根據(jù)美國(guó)藥典和歐洲藥典的方法進(jìn)行。

1、滅菌過程的驗(yàn)證

包括無菌檢查（連續(xù)14天30-35℃培養(yǎng)未觀察到細(xì)菌生長(zhǎng)，25-25℃培養(yǎng)未觀察到真菌生長(zhǎng)）和支原體檢測(cè)（PCR）。該無菌檢查同時(shí)也進(jìn)行有檢查過程的驗(yàn)證，即培養(yǎng)基用標(biāo)準(zhǔn)菌株接種≤100cfu進(jìn)行測(cè)試，細(xì)菌在20-25℃培養(yǎng)不超過3天，真菌不超過5天，以驗(yàn)證如有如下菌種，則該培養(yǎng)基即能檢查出來（表現(xiàn)為旺盛生長(zhǎng)）。具體所用菌株包括：金黃色葡萄球菌ATCC25923、大腸桿菌ATCC8739、大腸桿菌ATCC25922、大腸桿菌NCTC9002、銅綠假單胞菌ATCC9027、銅綠假單胞菌ATCC27853、藤黃微球菌ATCC9341、阿博尼沙門氏菌NCTC6017、肺炎鏈球菌ATCC6305、枯草芽孢桿菌ATCC6633、鼠傷寒沙門氏菌ATCC14028、金黃色葡萄球菌ATCC6538、白色念珠菌（ATCC10231）、白色念珠菌（ATCC 2019）、巴西曲霉（ATCC 16404）。以上信息即回答了《指南》要求的“輻照滅菌還需在產(chǎn)品質(zhì)量報(bào)告中體現(xiàn)驗(yàn)證中所用的菌種和劑量等信息”。

2、培養(yǎng)基促生長(zhǎng)能力試驗(yàn)

菌株接種量≤100cfu，培養(yǎng)條件30-35°C 18-24小時(shí)。所用標(biāo)準(zhǔn)菌株有金黃色葡萄球菌ATCC 6538、金黃色葡萄球菌ATCC 25923、大腸桿菌 ATCC 8739、大腸桿菌 ATCC 25922

大腸桿菌NCTC 9002、銅綠假單胞菌 ATCC 9027、銅綠假單胞菌ATCC 27853、枯草芽孢桿菌ATCC 6633、藤黃微球菌ATCC9341、鼠傷寒沙門氏菌ATCC 14028、阿博尼沙門氏菌NCTC6017、肺炎鏈球菌ATCC 6305。以上菌株即已包括《指南》提到的幾乎所有菌株，只是用的是ATCC來源的。對(duì)于《指南》提到的白色念珠菌（CMCC98001）和黑曲霉（CMCC98003），在滅菌驗(yàn)證中測(cè)試過。只有《指南》提到的生孢梭菌（CMCC64941）沒有測(cè)試，指南提到是必要時(shí)才去測(cè)試，企業(yè)可自行測(cè)試。

3、穩(wěn)定性檢查

這一點(diǎn)指南未作要求。HiMedia質(zhì)控要求室溫下放置7天，仍為淡黃色溶液，無任何沉淀產(chǎn)生。

總之，HiMedia生產(chǎn)的植物源TSB系列產(chǎn)品能滿足《指南》的各種要求，能夠給藥企的APS提供便利，值得大力推廣。

締一生物作為HiMedia公司中國(guó)區(qū)總代理，在制藥和生命科學(xué)領(lǐng)域，一如既往地為您帶來的服務(wù)。